BES-Thio - Fujifilm WAKO

Plusieurs réactifs chimioluminescents et fluorescents sont utilisés comme réactifs de détection de groupes thiol ou la mesure de l'activité de la cholinestérase.
La plupart de ces réactifs sont faiblement hydrophiles. De ce fait, des étapes de réaction enzymatiques et de détection doivent nécessairement être séparées.

BES-Thio est beaucoup plus hydrophile et peut être utilisé en solution aqueuse. Cette caractéristique facilite la mesure de l'activité enzymatique telle que la cholinestérase en utilisant l'acétylthiocholine ou la butyrylthiocholine comme substrat. Ppar ajustement du pH, BES-Thio peut également détecter des groupes de sérénol, dont le soufre (S) dans le groupe thiol est remplacé par du sélénium (Se), et peut être utilisé pour la détection de sélénoprotéine.

Longueur d'onde d'excitation: 495 nm
Longueur d'onde d'émission: 535 nm

Pourquoi choisir BES-Thio de FUJIFILM Wako ?

• Hautement hydrosoluble (peut être préparé en tant que solution aqueuse)
• Réactions enzymatiques et de détection simultanément 
• Réagit sélectivement au thiol à pH 7,4
• Réagit sélectivement au sérénol à pH 5,8

Protocole:

Préparer une solution d'éthanol à 5 ​​mM pour la solution mère.

La solution de sonde est préparée à partir de la solution mère diluée avec un tampon approprié et diluée 200 fois.

La solution de sonde peut être utilisée en mélangeant avec une solution de réaction enzymatique-substrat, etc.

Application:

Détermination de l'activité de la cholinestérase à l'aide d'une microplaque à 96 puits:
Mélanger 10 µL de solution de réaction enzymatique-substrat et 170 µL de solution de sonde et incuber la solution pendant un certain temps. Mesurer ensuite la fluorescence générée.

Référence:

1. Maeda, H., Matsuno, H., Ushida, M., Katayama, K., Saeki, K. and Itoh, N.: Angew. Chem. Int. Ed., 44, 2922 (2005).
2. Maeda, H., Katayama, K., Matsuno, H. and Uno, T.: Angew . Chem. Int. Ed., 45, 1810 (2006).
3. Maeda, H: Wako Jun-yaku Jiho, 73 (3), 2 (2005) (written inJapanese).