PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) - Fujifilm WAKO

Pourquoi choisir PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) de FUJIFILM-Wako ?

• Analyse qualitative sensible (détection 50 à 1000 fois plus sensible que la méthode western blot)

• Faible liaison non spécifique aux composants sanguins pour une détection sensible des EVs dans le sang

• Quantification relative directe des vésicules extracellulaires dans les échantillons de milieu conditionné et de fluide corporel

• Application aux systèmes de détection utilisant des anticorps de diverses espèces animales ou lectines

• Economie des exosomes: Microanalyse avec de petites quantités de vésicules extracellulaires (seulement 1/10 à 1/1000 de la quantité d'échantillon nécessaire pour la méthode western blot)

Principe:

La plaque 96 puits Exosome Capture est revêtue de protéines (Tim4) qui se lie spécifiquement à la phosphatidylsérine (PS) présentes à la surface des vésicules extracellullaires (EVs). Cela permet de capturer les EVs en présence de Ca2 +, puis un anticorps biotinylé dirigé contre la protéine marqueur de surface des EVs est utilisé comme détection primaire et la streptavidine conjuguée à la HRP est utilisée comme détection secondaire.

1 - Comparaison de la capacité de capture entre la méthode d'affinité PS et l'anticorps -

Les puits des microplaques, pré-revêtues d'anticorps anti-CD (CD9, CD63, CD81) et d'affinité PS (Tim4), ont été incubés avec des surnageants de culture cellulaire prétraités (10 000 x g, 30 min) de cellules iPSC, COLO201 et HEK293T. Les exosomes capturés sur la plaque ont été détectés à l'aide d'anticorps anti-CD biotinylés (CD9, CD63, CD81).

Ces résultats montrent qu'une majorité des exosomes, dérivés de diverses lignées cellulaires, ont été capturés plus efficacement par Tim4 (protéine qui se lie spécifiquement à la phosphatidylsérine, méthode du kit de FUJIFILM-Wako) que par les anticorps anti-CD9, 63, 81.

2 - Analyse de la chaîne du sucre par ELISA Sandwich avec rBC2LCN Lectin et Tim4 -

Les exosomes contenus dans une solution de surnageants de culture cellulaire de cellules iPS diluée 5 fois et prétraités (10 000 x g, 30 min) ont été détectés en utilisant un anticorps anti-CD63 biotinylé (W1W019-27713) et la lectine rBC2LCN biotinylée*.
Capture: Tim4 / Détection: composés marqués à la biotine

*rBC2LCN se lie spécifiquement à Fucα1-2Galβ 1-3GalNAc (GlcNAc) et est connu comme un marqueur indifférencié des cellules iPS et ES. Le rBC2LCN (W1W029-18061) a été biotinylé en utilisant EZ-Link™ Sulfo-NHS-LC-LC-Biotine (ThermoFisher).

Référence: S. Saito, et al., Sci. Rép., 8, 3997 (2018)

Le kit PS Affinity ELISA est applicable pour l'analyse de la chaîne de sucre sur les exosomes avec une combinaison variée de lectines.

Contenu du kit:

Plaque 96 puits pour la capture des exosomes  8 puits x 12 bandelettes/plaque
Joint de plaque  4 feuilles
Tampon de réaction  80 mL x 1
Tampon de lavage (10 x)  100 mL x 1
Amplificateur de liaison d'exosomes (100 x)  10 mL x 1
Anticorps de contrôle biotinylé Anti-CD63 (100 x)   120 µL x 1
Streptavidine conjuguée à la HRP (100 x)  240 µL x 1
Solution TMB  12 mL x 1
Solution d'arrêt  12 mL x 1