PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) - Fujifilm WAKO

Produit destiné à la recherche uniquement

Kit de détection qualitative et de mesure quantitative des exosomes par test ELISA utilisant la méthode d'affinité PS.

Référence: W1W298-80601

Conditionnement: 96 tests

Conservation: de +2°C à +10°C

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Ce coffret comprend les réactifs nécessaires au dosage immunoenzymatique par test ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) utilisé pour les analyses qualitative et quantitative des vésicules extracellulaires à partir du surnageant de culture cellulaire ou du liquide corporel. Les exosomes présents dans les surnageants de cultures et le sang, sont capturés par la protéine Tim4 sur une plaque sèche en présence d'ions calcium. Les exosomes capturés sont détectés par un anticorps primaire contre une protéine marqueur de surface d'exosome avec la streptavidine conjuguée à la HRP.

L'avantage de ce kit réside dans sa flexibilité à pouvoir utiliser différents anticorps d'une variété d'espèces animales ou des lectines pour la détection primaire, a contrario du kit ELISA Exosome PS Capture™ (anti-IgG de souris POD) (W1W297-79201) qui doit être utilisé uniquement avec des anticorps monoclonaux de souris. De plus, comme ce kit utilise de la streptavidine conjuguée à la HRP pour la détection secondaire, il présente qu'une faible liaison non spécifique aux composants sanguins. En conséquence, ce produit vous garantie une détection sensible des vésicules extracellulaires dans un échantillon de sang, impossible avec le PS Capture™ Kit ELISA Exosome (anti-IgG de souris POD).

Pourquoi choisir PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) de FUJIFILM-Wako ?
  • Analyse qualitative sensible (détection 50 à 1000 fois plus sensible que la méthode western blot)
  • Faible liaison non spécifique aux composants sanguins pour une détection sensible des EVs dans le sang
  • Quantification relative directe des vésicules extracellulaires dans les échantillons de milieu conditionné et de fluide corporel
  • Application aux systèmes de détection utilisant des anticorps de diverses espèces animales ou lectines
  • Economie des exosomes: Microanalyse avec de petites quantités de vésicules extracellulaires (seulement 1/10 à 1/1000 de la quantité d'échantillon nécessaire pour la méthode western blot)
Principe:
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La plaque 96 puits Exosome Capture est revêtue de protéines (Tim4) qui se lie spécifiquement à la phosphatidylsérine (PS) présentes à la surface des vésicules extracellullaires (EVs). Cela permet de capturer les EVs en présence de Ca2 +, puis un anticorps biotinylé dirigé contre la protéine marqueur de surface des EVs est utilisé comme détection primaire et la streptavidine conjuguée à la HRP est utilisée comme détection secondaire.
Analyse:
1 - Comparaison de la capacité de capture entre la méthode d'affinité PS et l'anticorps -

Les puits des microplaques, pré-revêtues d'anticorps anti-CD (CD9, CD63, CD81) et d'affinité PS (Tim4), ont été incubés avec des surnageants de culture cellulaire prétraités (10 000 x g, 30 min) de cellules iPSC, COLO201 et HEK293T. Les exosomes capturés sur la plaque ont été détectés à l'aide d'anticorps anti-CD biotinylés (CD9, CD63, CD81).

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01134_img04.png Ces résultats montrent qu'une majorité des exosomes, dérivés de diverses lignées cellulaires, ont été capturés plus efficacement par Tim4 (protéine qui se lie spécifiquement à la phosphatidylsérine, méthode du kit de FUJIFILM-Wako) que par les anticorps anti-CD9, 63, 81.

2 - Analyse de la chaîne du sucre par ELISA Sandwich avec rBC2LCN Lectin et Tim4 -

Les exosomes contenus dans une solution de surnageants de culture cellulaire de cellules iPS diluée 5 fois et prétraités (10 000 x g, 30 min) ont été détectés en utilisant un anticorps anti-CD63 biotinylé (W1W019-27713) et la lectine rBC2LCN biotinylée*.
Capture: Tim4 / Détection: composés marqués à la biotine

*rBC2LCN se lie spécifiquement à Fucα1-2Galβ 1-3GalNAc (GlcNAc) et est connu comme un marqueur indifférencié des cellules iPS et ES. Le rBC2LCN (W1W029-18061) a été biotinylé en utilisant EZ-Link™ Sulfo-NHS-LC-LC-Biotine (ThermoFisher).

Référence: S. Saito, et al., Sci. Rép., 8, 3997 (2018)

01134_img04.png Le kit PS Affinity ELISA est applicable pour l'analyse de la chaîne de sucre sur les exosomes avec une combinaison variée de lectines.

Contenu du kit:

Plaque 96 puits pour la capture des exosomes  8 puits x 12 bandelettes/plaque
Joint de plaque  4 feuilles
Tampon de réaction  80 mL x 1
Tampon de lavage (10 x)  100 mL x 1
Amplificateur de liaison d'exosomes (100 x)  10 mL x 1
Anticorps de contrôle biotinylé Anti-CD63 (100 x)   120 µL x 1
Streptavidine conjuguée à la HRP (100 x)  240 µL x 1
Solution TMB  12 mL x 1
Solution d'arrêt  12 mL x 1

Autres références disponibles :

W1W297-79201 - PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Anti Mouse IgG POD) - 96 tests

Mis à jour le : 2021-02-01 10:03:16