PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Anti Mouse IgG POD) - Fujifilm WAKO

Produit destiné à la recherche uniquement

Kit de détection qualitative et de mesure quantitative des exosomes par test ELISA utilisant la méthode d'affinité PS.

Référence: W1W297-79201

Conditionnement: 96 tests

Conservation: de +2°C à +10°C

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Ce coffret comprend les réactifs nécessaires au dosage immunoenzymatique par test ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) utilisé pour l'analyse qualitative des vésicules extracellulaires purifiées à partir du surnageant de culture cellulaire ou du liquide corporel mais également pour l'analyse quantitative des vésicules extracellulaires dans le surnageant de culture cellulaire directement. Ce produit vous permettra de détecter les exosomes à une sensibilité supérieure à celle des méthodes ELISA classiques d'immobilisation d'anticorps contre les marqueurs de surface d'exosomes. Les exosomes présents dans les surnageants de cultures et le sérum, sont capturés par la protéine Tim4 sur une plaque sèche en présence d'ions calcium. Les exosomes capturés sont détectés par un anticorps primaire contre une protéine marqueur de surface d'exosome et un anticorps secondaire IgG anti-souris conjugué à la HRP. Bien qu'un anticorps monoclonal anti-CD63 de souris est fourni avec ce kit, un anticorps primaire de souris dirigé contre tout autre marqueur de surface d'exosome peut également être utilisé pour la détection d'exosomes.

Ce kit permet de détecter facilement les protéines marqueurs de surface des vésicules extracellulaires purifiées par MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS (W1W293-77601) avec une sensibilité 50 à 1000 fois plus élevée qu'avec la méthode de Western Blot. Enfin, les vésicules extracellulaires, contenues dans le surnageant de culture cellulaire, peuvent être quantifiées en utilisant des vésicules extracellulaires purifiées à partir du surnageant de culture cellulaire avec MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS comme étalon de référence.

Pourquoi choisir PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Anti Mouse IgG POD) de FUJIFILM-Wako ?
  • Mesure quantitative directe des vésicules extracellulaires dans le surnageant de culture (nécessite un standard purifié avec le kit d'isolement des exosomes MagCapture™)
  • Détection avec une haute sensibilité des vésicules extracellulaires par la méthode d'affinité PS (sensibilité de 50 à 1 000 fois supérieure à celle de la méthode par Western blot)
  • Analyse qualitative directe des exosomes dans le surnageant de culture
  • Economie du nombre d'exosomes utilisés pour l'analyse (moins de 1/10 à 1/1000 du nombre requis pour la méthode par Western blot)
  • Anticorps de détection primaire de contrôle anti-CD63 attaché comme anticorps primaire
Analyse:

La plus grande caractéristique de ce kit est qu'il fournit une détection des exosomes avec une sensibilité plus élevée que celle de l'analyse Western Blot et du produit conventionnel pour l'ELISA des exosomes. Tout d'abord, la limite de détection des exosomes dans Western Blotting a été examinée pour comparaison avec ce kit (figures 1a et b). L'analyse Western Blot d'exosomes purifiés à partir de cellules COLO201 (d'origine adénocarcinome du côlon humain) avec un anticorps monoclonal anti-CD63 a détecté des exosomes en une quantité aussi petite que 75 ng sur la base des protéines. Ensuite, les limites de détection de ce kit pour les exosomes purifiés à partir de cellules K562 (d'origine leucémique humaine) et de cellules COLO201 ont été déterminées à 49,9 pg et 10,9 pg, respectivement, démontrant que ce kit avait une sensibilité de détection plus de 1000 fois plus élevée que cela. de Western Blot (figure 1c). Considérant que les limites de détection des produits conventionnels pour l'ELISA des exosomes varient d'environ plusieurs ng à plusieurs μg (reportez-vous aux manuels d'instructions des produits individuels), les présents résultats ont démontré que ce kit utilisant la liaison d'affinité des exosomes à Tim4 via PS a une sensibilité supérieure à 100 fois plus élevées que celles des méthodes ELISA conventionnelles impliquant l'immobilisation d'un anticorps contre un marqueur de protéine de surface d'exosome.

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Fig.1 Comparaison des sensibilités de détection du Western Blot et du PS ELISA -

(a) et (b): Résultat de la sensibilité par Western Blot avec chacun des anticorps anti-CD63 (fournisseur A et Wako: W1W012-27063).
Échantillon: vésicules extracellulaires purifiées à partir du surnageant de culture cellulaire de cellules COLO201 avec MagCaptureTM Exosome Isolation Kit PS (W1W293-77601)
★ : limite de détection par Western Blot
(c): Résultat de la limite par PS ELISA
Une courbe standard a été préparée en utilisant la valeur à blanc du tampon et la valeur d'absorbance d'échantillons de dilution en série 2 fois de vésicules extracellulaires purifiées à partir du surnageant de culture cellulaire de cellules K562 et de celui de cellules COLO201 avec MagCapture ™ Exosome Isolation Kit PS. Ensuite, la limite de détection des vésicules extracellulaires purifiées de cellules K562 et de cellules COLO201 a été calculée en utilisant sa courbe standard. (chaque point de dilution: n = 6, blanc: n = 12)

2 - Comparaison de la sensibilité de détection de divers kits ELISA utilisant des exosomes purifiés à partir du surnageant de culture cellulaire COLO201 et du sérum humain

Les échantillons suivants (1) à (6) ont été préparés et utilisés pour comparer la sensibilité de détection du kit ELISA PS Capture™ Exosome, du kit ELISA du concurrent A et du kit ELISA du concurrent A (type haute sensibilité) avec détection de CD63, un exosome protéine marqueur.
Échantillons utilisés pour la comparaison

(1) Norme incluse dans le kit ELISA du concurrent A
(2) Norme incluse dans le kit ELISA du concurrent A (type haute sensibilité)
(3) Exosomes purifiés à partir du surnageant de culture cellulaire COLO201 à l'aide du MagCapture ™ Exosome Isolation Kit PS
(4) Exosomes purifiés à partir du surnageant de culture cellulaire COLO201 par précipitation de polymère
(5) Exosomes purifiés à partir de sérum humain à l'aide du MagCapture ™ Exosome Isolation Kit PS
(6) Exosomes purifiés à partir de sérum humain par précipitation de polymère

Taux de dilution et concentrations de protéines

(1)(2)(3)(4)(5)(6)
x 1 1/16 1/1000 40 ng/mL 160 ng/mL 800 ng/mL 2000 µg/mL
x 0.5 1/32 1/2000 20 ng/mL 80 ng/mL 400 ng/mL 1000 µg/mL
x 0.25 1/64 1/4000 10 ng/mL 40 ng/mL 200 ng/mL 500 µg/mL
x 0.125 1/128 1/8000 5 ng/mL 20 ng/mL 100 ng/mL 250 µg/mL
x 0.0625 1/256 1/16000 2.5 ng/mL 10 ng/mL 50 ng/mL 125 µg/mL
0 (blanc) 0 0 0 0 0 0

Comparaison de la sensibilité de détection des kits ELISA d'exosomes individuels

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01134_img04.png Le kit ELISA Exosome PS Capture ™ détecte le CD63 avec une sensibilité supérieure à celles du kit ELISA du concurrent A et du kit ELISA du concurrent A (type haute sensibilité). Alors que le kit ELISA du compétiteur A et le kit ELISA du compétiteur A (type haute sensibilité) ont fortement réagi avec les standards de leur kit, leur réactivité aux exosomes purifiés par la méthode d'affinité PS était faible.

01134_img04.png Ces résultats suggèrent que le kit ELISA Exosome PS Capture ™ était capable de détecter le CD63 à la surface des exosomes plus spécifiquement et à une sensibilité plus élevée que le kit ELISA du concurrent A et le kit ELISA du compétiteur A (type haute sensibilité).

Contenu du kit:

Plaque 96 puits de capture des exosomes  8 puits × 12 bandelettes / 1 plaque

Tampon de réaction / lavage (10 ×)  50 mL × 2 flacons

Amplificateur de liaison aux exosomes (100 ×)  10 mL × 1 flacon

Anticorps primaire Control Anti-CD63 (100 ×)  120 μL × 1 flacon

Anticorps secondaire IgG anti-souris conjuguée à l'HRP (100 ×)  120 μL × 1 flacon

Solution TMB  12 mL × 1 flacon

Solution d'arrêt  12 mL × 1 flacon

Plaque scellée  4

feuilles Manuel d'instructions 1 exemplaire

Autres références disponibles :

W1W298-80601 - PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) - 96 tests

Mis à jour le : 2021-02-01 10:04:43