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MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS - Fujifilm WAKO
Produit destiné à la recherche uniquement
Concentration / Isolement / Purification des exosomes.
Kit de purification des exosomes par méthode d'affinité à partir du surnageant de culture cellulaire, des échantillons de sérum, de plasma et d'urine.
Référence: W1W299-77603
Conditionnement: 2 tests
Conservation: de +2°C à +10°C
En savoir plus
Ce coffret vous permettra d'isoler facilement les vésicules extracellulaires que sont les exosomes à partir des échantillons de surnageant de culture cellulaire, de sérum et de plasma par une méthode innovante d'affinité. Cette méthode implique des billes magnétiques recouvertes de molécules d'affinité pour la phosphatidylsérine (PS), un phospholipide présent à la surface de la membrane des exosomes. Cette technique, au protocole optimisé, présente l'avantage d’obtenir un rendement très élevé d'exosomes intacts et de grande pureté par rapport à la méthode conventionnelle d’ultracentrifugation.
Les vésicules extracellulaires sont capturées par des protéines de liaison à la phosphatidylsérine (Tim4) et des ions métalliques. Une fois capturés, ces exosomes sont élués avec un agent chélatant dans des conditions neutres qui vous aidera à obtenir des exosomes intacts.
- Opération simple par une nouvelle méthode d'affinité et des billes magnétiques
- Purification avec un rendement élevé d'exosomes, ou autres vésicules extracellulaires, de grande pureté
- Concentration d'exosomes intactes à l'aide d'une élution douce avec un agent chélatant dans des conditions neutres
- Haute reproductibilité
- Ne requiert aucune étape d'ultracentrifugation
- Protocole optimisé
| Méthodes | Pureté | Quantité récupérée | Intact ou non |
|---|---|---|---|
| MagCapture™ (méthode d'affinité PS) | ++++ | +++ | Oui |
| Ultracentrifugation | ++ | ++ | Oui |
| Précipitation à base de polymère | + | ++ | Oui |
| Méthode de centrifugation par gradient de densité | +++ | + | Oui |
| Méthode de fractionnement par taille | +++ | ++ | Oui |
| Méthode d'affinité de l'antigène de surface de l'exosome (en utilisant l'anticorps) | +++ | ++ | Non |
Protocole:
Analyse:
1 - Analyse des vésicules extracellulaires purifiées à partir d'échantillons de surnageant de culture
Le rendement et la pureté ont été comparés pour les exosomes isolés à partir de surnageants de culture de cellules K562 (leucémie mylogène chronique humaine, LMC) (milieu sans sérum ou milieu FBS appauvri en exosomes à 10%) en utilisant MagCapture ™, la méthode d'ultracentrifugation et méthode de précipitation à base de polymère.
- Kit d'isolation des exosomes MagCapture ™ PS
Les exosomes ont été récupérés à partir de 1 mL de surnageant de culture cellulaire prétraité (10 000 × g, 30 min.) De cellules K562 (milieu sans sérum ou FBS appauvri à 10% d'exosomes ※ 1 milieu inclus) en utilisant le protocole standard de la méthode d'affinité PS (temps de réaction : 3 heures)
- Ultracentrifugation
10 ml de surnageant de culture cellulaire prétraité (10 000 × g, 30 min.) De cellules K562 (milieu sans sérum ou FBS à 10% exosomé ※ 1 inclus milieu) ont été ultracentrifugés à 110000 × g, 70 min., Et les précipités ont été suspendus avec TBS. Ensuite, la suspension a de nouveau été ultracentrifugée et le culot précipité a été récupéré comme échantillon d'exosome.
- Précipitation à base de polymère
Les exosomes ont été collectés à partir de 1 ml de surnageant de culture cellulaire prétraité (10000 × g, 30 min.) De cellules K562 (milieu sans sérum ou milieu inclus FBS ※ 1 appauvri en exosomes à 10%) par le produit du fournisseur A conformément au manuel (Précipitation temps: pendant la nuit).
Analyse par microscopie électronique et Nano analyse d'exosomes isolés
La taille des particules des exosomes du surnageant de culture cellulaire K562 (milieu sans sérum) en utilisant MagCapture ™, l'ultracentrifugation et la précipitation à base de polymère, respectivement, a été déterminée en utilisant NanoSight LM-10. Les exosomes collectés (2-4 x 1010 particules) ont été fixés par 2% de paraformaldéhyde et analysés par microscopie électronique.
Les images au microscope électronique ont été fournies par le Dr. R. Hanayama de l'École supérieure de médecine de l'Université de Kanazawa et le Dr. Nakai de l'iFReC, de l'Université d'Osaka.
MagCapture ™ permet la récupération de nombreuses particules d'environ 50 à 100 nm visibles en microscopie électronique.
2 - Comparaison de la quantité de récupération des microARNs et d'ARNm à partir d'exosomes isolés à l'aide de différentes techniques -
Après isolement des exosomes à partir d'échantillons de sérum humain par ultracentrifugation et par la méthode d'affinité PS, l'ARN a été récupéré en utilisant le kit microRNA Extractor SP (W1W295-71701). Les microARN (let-7a, miR-16, miR-92a, miR-142-3p) et les ARNm (GAPDH, PIK3CB) ont été déterminés par PCR quantitative et comparés à l'aide des valeurs Ct.
Les microARNs et les ARNm ont été récupérés plus efficacement à partir d'exosomes isolés par la méthode d'affinité PS que ceux isolés par la méthode d'ultracentrifugation.
Contenu des kits:
10 tests (W1W293-77601) -
1) Perles magnétiques streptavidine 600 µL x 1 tube
2) Exosome Capture marqué à la biotine 100 µL x 1 tube
3) Tampon d'immobilisation de capture d'exosomes 35 mL x 1 bouteille
4) Exosome Binding Enhancer (x 500) 500 µL x 1 tube
5) Tampon de lavage 75 ml x 2 bouteilles
6) Tampon d'élution d'exosome 5 mL x 1 bouteille
7) Tubes de réaction 22 tubes
2 tests (W1W299-77603) -
1) Perles magnétiques streptavidine 120 µL x 1 tube
2) Exosome Capture marqué à la biotine Tube de 20 μL x 1
3) Tampon d'immobilisation de capture d'exosomes 7 mL x 1 bouteille
4) Exosome Binding Enhancer (x 500) 100 µL x 1 tube
5) Tampon de lavage 30 mL x 1 bouteilles
6) Tampon d'élution d'exosome 1 mL x 1 bouteille
7) Tubes de réaction 4 tubes
Nos références produits:
W1W299-77603 - MagCapture Exosome Isolation Kit PS - 2 tests