Sous l’action de l’Acyl-CoA synthétase, et en présence de coenzyme A et de sel trisodique d’adénosine 5-triphosphate (ATP), les Acides Gras Non Estérifiés de l’échantillon sont transformés en Acyl-CoA, AMP et acide pyrophosphorique (PPI).

Grâce à l’Acyl-CoA oxydase (ACOD), l’Acyl-CoA obtenu est oxydé et libère du 2,3-trans-Enoyl-CoA et du peroxyde d’hydrogène. En présence de peroxydase (POD), le peroxyde d’hydrogène libéré conduit à la formation d’un pigment bleu violet par condensation oxydative avec la 3-Méthyl-N-Ethyl-N-(β-Hydroxyéthyl)-Aniline (MEHA) et la 4-amino-antipyrine (4-AA).

La concentration en Acides Gras Non Estérifiés (NEFA) s’obtient par la mesure de l’absorbance du composé coloré en bleu violet.

Standard NEFA - Référence : 1W270-77000