En présence de la colipase, du desoxycholate et des ions calcium, la lipase pancréatique hydrolyse le substrat 1-2-O-dilauryl-rac-glycero-3-glutaric en acid-(6'-methylresorufin)-ester.

Le taux de methylresorufine formé, mesuré par photométrie, est proportionnel à la concentration catalytique de la lipase présente dans l'échantillon.