L’Urée dans l’échantillon est hydrolysée par voie enzymatique en ammoniaque (NH4+) et dioxyde de carbone (CO2).

Les ions ammoniums formés réagissent avec les salicylates et l’hypochlorite (NaClO), en présence du nitroprussiate,  catalyseur pour former l’indophenol : composé de couleur verte.

L’intensité de la couleur formée, est proportionnelle à la concentration de l’Urée dans l’échantillon.