Les phospholipides sont hydrolysés par la phospholipase D, la choline libérée est ensuite oxydée par la choline oxydase (CHO) en bétaîne, avec production simultanée de peroxyde d’hydrogène.

En présence de peroxidase (POD), le peroxyde d’hydrogène forme avec le 4-aminophenazone (4-AP) et le dichlorophenol  la quinoneimine.

L’intensité de la couleur formée est proportionnelle à la concentration des Phospholipides.